胞外體是胞外聚合物嗎?
作者:訪客發(fā)布時間:2021-07-08分類:聚合物瀏覽:80
??(1)胞外聚合物的提取 胞外聚合物(Extracelluler Polymer Substances, EPS)與細胞結(jié)合緊密,需要特定的方法才能將其從污泥中分離提出。在本實驗中采用Fr?lund等人[ ]的方法來提取活性污泥表面的胞外聚合物。
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首先,從反應(yīng)器中取50mL活性污泥樣品,在2000g、室溫下離心15min后倒出上清液。離心后再向留在離心管內(nèi)的生物體加入由526mg?L-1 NaCl,74。56mg?L-1KCl,760。2mg?L-1Na3PO4和552mg?L-1NaH2PO4組成的磷酸鹽緩沖溶液,使之再次呈懸浮液態(tài)。
??再將懸浮污泥樣品移入燒杯中,在其中加入90g?gMLVSS-1的離子交換樹脂(732陽離子交換樹脂)并以600rpm轉(zhuǎn)速攪拌2h,使之混合。混合后再于4000g離心300min以去除樹脂和生物體,上清液則為EPS提取液[ ]。
(2)胞外聚合物的分析方法 EPS提取物中主要是多糖、蛋白質(zhì)和DNA。
??多糖的測定采用蒽酮—H2SO4比色法[ ]。即高溫下糖類會被H2SO4脫水生成糠醛或糠醛衍生物,并與蒽酮(C14H10O)縮合成藍色化合物,在620nm處測定吸光度(721型分光光度計),以葡萄糖的標準曲線可換算出多糖的含量[ , ]。
蛋白質(zhì)采用紫外吸收法測定,同時測定260nm和280nm處的吸光度,利用下式計算蛋白質(zhì)的濃度(mg?mL-1):ρ蛋白質(zhì)=1。
??45×A280nm-0。74×A260nm,該方法可消除樣品中和算對測定值的干擾。EPS的含量最終以單位質(zhì)量MLVSS中各成分的總量計。
DNA的測定采用修正的Brunk方法[ ],主要試劑為:用100 mM NaCl中配制0。2 ppm DAPI試劑 (4, 6-二咪基-2-苯基吲哚),10 mM EDTA,10 mM TRIS,pH 7。
??步驟: 將100 μL的 EPS 提取液用吸液管裝入試管中并加入2。5 ml上述試劑。直接測定樣品(激發(fā)波長360nm、發(fā)射波長450 nm),Salmon實驗采用標準方法。
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