elisa試劑盒的主要設(shè)備

試劑

（1） 包被緩沖液（PH9.60.05M碳酸鹽緩沖液）:

Na2CO3 1.59克

NaHCO3 2.93克

加蒸餾水至1000ml

（2） 洗滌緩沖液（PH7.4PBS）：0.15M

KH2PO4 0.2克

Na2HPO4?12H2O 2.9克

NaCl 8.0克

KCl 0.2克

Tween-20 0.05% 0.5ml

加蒸餾水至1000ml

（3） 稀釋液：

牛血清白蛋白（BSA） 0.1克

加洗滌緩沖液至100ml

或以羊血清、兔血清等血清與洗滌液配成5～10%使用。

（4） 終止液（3M H2SO4）：

蒸餾水178.3ml，逐滴加入濃硫酸（98%）21.7ml。

（5） 底物緩沖液（PH5.0磷酸棗檸檬酸）:

0.2MNa2HPO4（28.4克/L）25.7ml

0.1M檸檬酸（19.2克/L） 24.3ml

加蒸餾水50ml。

（6） TMB（四甲基聯(lián)苯胺）使用液:

TMB（10mg/5ml無水乙醇）0.5ml

底物緩沖液（PH5.5） 10ml

0.75%H2O2 32μl

（7） ABTS使用液:

ABTS 0.5mg

底物緩沖液（PH5.5） 1ml

3%H2O2 2μl

（8） 抗原、抗體和酶標(biāo)記抗體。

（9） 正常人血清和陽性對照血清。

器材

（1） 聚苯乙烯塑料板（簡稱酶標(biāo)板）40孔或96孔，ELISA檢測儀，50μl及100μl加樣器，塑料滴頭，小毛巾，洗滌瓶。

（2） 小燒杯、玻璃棒、試管、吸管和量筒等。

（3） 4℃冰箱，37℃孵育箱。

試驗(yàn)原理

試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）.已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測。先將生物素標(biāo)記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中的濃度呈比例關(guān)系。

自備材料

1． 蒸餾水。

2． 加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。

3． 振蕩器及磁力攪拌器等。

安全性

1． 避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。

2． 實(shí)驗(yàn)中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。

3． 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

4． 試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。

5． 實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。

6． 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。

7． 使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。

8． 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。

9． 洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。

10． 底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。

11． 加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。

12． 按照說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。

有誰對ELISA試劑盒了解？？

（一）ELISA測定技術(shù)的發(fā)展

然而，影響Elisa試驗(yàn)結(jié)果的因素很多，故加強(qiáng)各個環(huán)節(jié)的質(zhì)量保證才能充分發(fā)揮其方法學(xué)的優(yōu)點(diǎn)。 一、Elisa試劑盒測定技術(shù)的發(fā)展 臨床測定技術(shù)的發(fā)展主要在于方法學(xué)的發(fā)展，而方法學(xué)的發(fā)展依托于試劑生產(chǎn)技術(shù)不斷進(jìn)步更新和型標(biāo)記物的應(yīng)用。目前，分子生物學(xué)正在并最終肯定會讓我們對整個生命科學(xué)有一個全面而徹底的認(rèn)識，其對免疫測定技術(shù)發(fā)展的影響也是直接而又有效的，它使我們對以前一些難以檢測的生物活性物質(zhì)的測定變得輕而易舉，并且大大提高了檢測的靈敏度和特異性。 1、基因工程試劑對免疫測定技術(shù) 發(fā)展的影響 免疫測定技術(shù)的基礎(chǔ)在于抗原抗體之間的特異結(jié)合反應(yīng)，所以任何優(yōu)質(zhì)的診斷試劑離不開優(yōu)質(zhì)的原料，如抗原抗體，酶等。以前用于免疫測定的抗原通常為各種純化抗原，而抗體則為純化抗原免疫動物后獲得的多克隆抗體和使用雜交瘤技術(shù)得到的單克隆抗體，而抗原或抗體的標(biāo)記物如酶標(biāo)結(jié)合物則通過各總化學(xué)合成方法制備。近年來，隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，使用基因工程方法制備各種特殊的抗原或抗體及其酶結(jié)合物等免疫測定試劑幾成為現(xiàn)實(shí)的新一代試劑，各種新型使用的測定方法也不斷出現(xiàn)。 HBsAg試劑特點(diǎn)（檢測模式：臨 床抗體夾心法）： 包被抗體為山羊多抗，多抗具有高親和性和對抗原各種表位的反應(yīng)性。 酶表抗體為與HBsAg有不同結(jié)合位點(diǎn)的鼠復(fù)合單位。 可測得HBsAg變異樣品。 提高檢測的特異性（99.98%） 提高檢測的靈敏度，應(yīng)用Parl Ehrich 學(xué)說（PEI）HBsAg標(biāo)準(zhǔn)品，對ad標(biāo)準(zhǔn)品的靈敏度為0.05ng/ml對ay標(biāo)準(zhǔn)品靈敏度為0.025ng/ml elisa試劑盒的用途 測試劑盒檢測原理 ELISA檢測試劑盒應(yīng)用定性夾心免疫檢測技術(shù)，用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板條，這些多肽是中國型HEV毒株核心氨基酸序列中抗原性很強(qiáng)的肽段，分別來自于該毒株的開放閱讀框2和開放閱讀框3。將樣品或標(biāo)準(zhǔn)品加入孔中并孵育，如果其中存在HEV IgM抗體，這些抗體就會與HEV 的多肽抗原結(jié)合，并固定在上面，洗板除去其它非特異性抗體和樣品中的其它成份。然后加入羊抗人IgM-HRP（辣根過氧化物酶）酶結(jié)合物，經(jīng)第二次孵育后，酶結(jié)合物就會與第一次孵育結(jié)合上的HEV IgM抗體相結(jié)合，洗板除去未結(jié)合的酶結(jié)合物，加入TMB底物溶液，在第三次孵育時會發(fā)生酶-底物反應(yīng)，只有那些含有HEV IgM抗體和酶結(jié)合物所形成的復(fù)合物的孔才會發(fā)生顏色變化，加入硫酸溶液終止酶和底物間的反應(yīng)，并在波長: 450nm處測量O.D.值,按照本HEV IgM抗體elisa試劑盒 的測試標(biāo)準(zhǔn), O.D.值大于或等于Cut-Off值的樣品被認(rèn)為是初試陽性

[編輯本段]（二） 操作步驟

方法一 用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法: 1. 包被：用0.05MPH9.短妓嵫偉換撼逡航固逑∈橢戀鞍字屎課1～10μg／ml。在每個聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml，4℃ 過夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。（簡稱洗滌，下同）。 2. 加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃ 孵育1小時。然后洗滌。（同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔）。 3. 加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體（經(jīng)滴定后的稀釋度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小時，洗滌。 4. 加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。 5. 終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。 6. 結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。 方法二 用于檢測未知抗體的間接法： 用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg／ml， 每孔加0.1ml，4℃過夜。次日洗滌3次。 ↓ 加一定稀釋的待檢樣品（未知抗體）0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔 中,置37℃孵育1小時,洗滌。（同時做空白、陰性及陽性孔對照） ↓ 于反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體（抗抗體）0.1ml， 37℃孵育30-60分鐘，洗滌,最后一遍用DDW洗滌。 ↓ 其余步驟同“雙抗體夾心法”的4、5、6。

[編輯本段]（三） 試劑器材

1. 試劑 （1） 包被緩沖液（PH9.60.05M碳酸鹽緩沖液）: NaHCO3 1.59克 NaHCO3 2.93克 加蒸餾水至1000ml （2） 洗滌緩沖液（PH7.4PBS）：0.15M KH2PO4 0.2克 Na2HPO4?12H2O 2.9克 NaCl 8.0克 KCl 0.2克 Tween-20 0.05％ 0.5ml 加蒸餾水至1000ml （3） 稀釋液： 牛血清白蛋白（BSA） 0.1克 加洗滌緩沖液至100ml 或以羊血清、兔血清等血清與洗滌液配成5～10％使用。 （4） 終止液（2M H2SO4）： 蒸餾水178.3ml，逐滴加入濃硫酸（98％）21.7ml。 （5） 底物緩沖液（PH5.0磷酸棗檸檬酸）: 0.2MNa2HPO4（28.4克／L）25.7ml 0.1M檸檬酸（19.2克／L） 24.3ml 加蒸餾水50ml。 （6） TMB（四甲基聯(lián)苯胺）使用液: TMB（10mg／5ml無水乙醇）0.5ml 底物緩沖液（PH5.5） 10ml 0.75％H2O2 32μl （7） ABTS使用液: ABTS 0.5mg 底物緩沖液（PH5.5） 1ml 3％H2O2 2μl （8） 抗原、抗體和酶標(biāo)記抗體。 （9） 正常人血清和陽性對照血清。 2. 器材: （1） 聚苯乙烯塑料板（簡稱酶標(biāo)板）40孔或96孔，ELISA檢測儀，50μl及100μl加樣器，塑料滴頭，小毛巾，洗滌瓶。 （2） 小燒杯、玻璃棒、試管、吸管和量筒等。 （3） 4℃冰箱，37℃孵育箱。

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