雙水相的疏水因子HF值越大,則溶質(zhì)的分配系數(shù)越( ),為何?
作者:化工綜合網(wǎng)發(fā)布時(shí)間:2022-02-03分類:無機(jī)化工瀏覽:148
分配系數(shù)
INM=INMe(靜電作用)+INMh(疏水作用)+INMl(生物親和作用)
靜電作用
實(shí)際的雙水相系統(tǒng)中通常含有緩沖液和無機(jī)鹽等電解質(zhì),當(dāng)這些離子在兩相中分配濃度不同時(shí),將在兩相間產(chǎn)生電位差。此時(shí),荷電溶質(zhì)的分配平衡將受相間電位的影響。
疏水作用
(1)在pH為等電點(diǎn)的雙水相中,蛋白質(zhì)主要根據(jù)表面疏水性的差異產(chǎn)生各自的分配平衡。同時(shí),疏水性一定的蛋白質(zhì)的分配系數(shù)受雙水相系統(tǒng)疏水性的影響。
(2)雙水相系統(tǒng)的相間疏水性差用疏水性因子HF表示。
影響分配因素
(1) 聚合物及其濃度組成的影響
a 相對分子質(zhì)量
b 降低聚合物的分子質(zhì)量,則蛋白質(zhì)易分配于富含該聚合物的相中。
c 聚合物濃度影響 成相系統(tǒng)的總濃度越高,系線越長,蛋白質(zhì)越容易分配于其中的某一相
(2)鹽與緩沖液
a 鹽離子的不均勻分配改變兩相間電位差
b影響蛋白質(zhì)的表面疏水增量,不同鹽的鹽析效果不同
c 擾亂雙水相系統(tǒng),改變相組成。
(3) pH
a改變表面電荷數(shù),改變分配系數(shù)。 因此,pH與蛋白質(zhì)的分配系數(shù)之間存在一定關(guān)系。
等電點(diǎn)測定: 加入不同種類的鹽時(shí),由于相間電位不同,它們之間的關(guān)系曲線也不同,但在等電點(diǎn)處,由于Z=0,分配系數(shù)應(yīng)相同,即關(guān)系曲線交于一點(diǎn)。
通過測定不同鹽類存在下分配系數(shù)與pH值之間的關(guān)系曲線的交點(diǎn),可測定蛋白質(zhì)等的等電點(diǎn),這種方法稱為交錯(cuò)分配法。
b pH 影響磷酸鹽的解離。因此影響PEG/KPi系統(tǒng)的相間電位和蛋白質(zhì)的分配系數(shù)。
c蛋白質(zhì)自身結(jié)構(gòu)和性質(zhì)隨pH的變化而改變
(4) 溫度的影響(離開臨界點(diǎn)遠(yuǎn),不太敏感) 一般常溫
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