固相萃取儀的萃取效率受哪些因素的影響

然而影響萃取效率的因素有以下幾種：

（1）填料（固定相）-核心

選擇合適的SPE柱填料是保證理想結果的前提。

（2）洗脫溶劑的強度

1.采用正相固定相，溶劑強度隨其極性增強而增強

2.采用反向固定相，溶劑強度隨其機性減弱而增強（3）PH值

離子交換固定相、被分析物和干擾物質的PKa各不相同。通過調節(jié)PH大小，可以使固定相帶電荷，被分析物帶相反電荷，而使干擾物質不帶電荷；或者反過來，使固定相帶電荷，干擾物帶相反電荷，而使被分析物不帶電荷，從而達到分離純化的目的。

目前，氮吹儀也叫氮氣吹干儀，自動快速濃縮儀等，在市場上普遍有兩種：干式氮吹儀和水浴式氮吹儀。氮吹儀代替?zhèn)鹘y(tǒng)的旋轉蒸發(fā)儀對樣品進行濃縮已經被越來越多的人認可并接受。

1. 氮吹儀的工作原理

我們知道，加快蒸發(fā)有兩個方法：加強它周圍的空氣流動和它的溫度。氮氣是一種不活潑的氣體，能起到隔絕氧氣的作用，防止氧化。氮吹儀利用氮氣的快速流動打破液體上空的氣液平衡，從而使液體揮發(fā)速度加快；并通過干式加熱或水浴加熱方式升高溫度（目標物的沸點一般比溶劑的要高一些），從而達到了濃縮的目的。

2. 氮吹儀的主要部件

主要包括氣體分配室、氣針、高度調節(jié)支架、氮氣接口、高度微調部件、支柱、固定組件、機箱、襯套、加熱塊、樣品試管或試瓶等部件。

3. 氮吹儀的使用方法（以水浴式氮吹儀為例）

氮吹儀安裝好后，底盤支撐在恒溫水浴內，打開水浴電源，設定水浴溫度，水浴開始加熱。提升氮吹儀，將需要蒸發(fā)濃縮的樣品分別安放在樣品定位架上，并由托盤托起，其中托盤和定位架高低可根據實驗樣品試管的大小調整。打開流量計針閥，氮氣經流量計和輸氣管到達配氣盤，配氣后送往各樣品位上方的針閥管（安裝在配氣盤上）。然后，通過調節(jié)針閥管針閥，氮氣經針閥管和針頭吹向液體樣品試管，可通過調整鎖緊螺母可以上下滑動針閥管，調整針頭高度，以樣品表面吹起波紋，樣品又不濺起為好。最后，將氮吹儀放于水浴中，直到蒸發(fā)濃縮完成。

4. 氮吹儀的優(yōu)點

（1）一次可處理多個樣品，在多因素、多水平的重復實驗中優(yōu)勢更為明顯。

（2）實驗操作簡潔、靈活?？梢圆皇芗s束地隨時調節(jié)濃縮的進程。

（3）實驗中不需要操作者長時間的維護，節(jié)省人力。

（4）氮吹儀在濃縮時準確、靈敏可避免樣品損失。

5. 氮吹儀的應用領域

氮吹儀主要用于色譜、質譜等分析樣品的純化和制備，廣泛應用于水、甲苯、甲醇、丙酮等溶劑的揮發(fā)。應用領域有：

（1）農殘分析：如蔬菜、水果、谷物、植物組織

（2）環(huán)境分析：如飲用水、地下水和污染水水樣

（3）制藥藥檢：如中藥制藥

（4）生物分析：如血清、血漿、血液、尿液

（5）商品檢驗：如二f英、克羅特羅等的檢驗（6）食品飲料：如牛奶、酒、啤酒、液體飲料

高效液相色譜儀的使用和原理分析

高效液相色譜儀(HPLC)是分析實驗室常用的測試儀器之一，其應用越來越廣泛。此種儀器在使用過程中，難免會出現各種各樣的問題，并將直接影響到所測數據的準確性和儀器的正常工作。操作者如果能了解故障的成因，即可清楚預防和排除這些故障的方法，就可正確地使用儀器并最大限度地發(fā)揮儀器的性能。今天我們要從以下幾個方面和您分享下在使用高效液相色譜儀中需注意的幾個問題。

一、使用試管的問題

1、試管的潔凈問題。

高效液相色譜分析法是一個很靈敏的分析方法，如果因使用不潔凈的試管，便會影響試驗結果的準確性。例如，在用甲醇作溶劑來溶解樣品時，所用的小試管是用橡膠塞來做蓋子的，因此，在每次進樣時，都有一個保留時間固定的干擾峰存在，后經證實，此干擾峰是由甲醇浸泡橡膠塞而溶下的組分所產生，換用玻璃試管后，干擾峰消除。

2、塑料試管的溶解問題。

近年來，一次性塑料試管給試驗人員帶來了極大的方便，但是，在使用過程中一定要注意有機溶劑對試管的溶解現象，在利用此種試管提取樣品時，有些有機溶劑(如氯仿等)對管壁有溶解現象，這些被溶解下來的物質有時也能在檢測器上產生信號，從而干擾樣品的測定。這時，可用相同的實驗條件先行試驗一下，看看不含被抽提物時，提取液在檢測器上能否產生干擾信號，如確有干擾信號存在，就只能換用耐有機溶劑的玻璃試管了。

3、被測樣品在試管壁上的吸附問題。

這個問題也應引起注意，否則也會影響測試結果的準確性，在治療藥物監(jiān)測(Therapeutic Drug Monitoring,TDM)中，有些被測藥物如阿米替林，丙咪嗪等易吸附在玻璃試管的管壁上，因此，操作中宜采用聚丙烯管，為防止提取中吸附現象的發(fā)生，可采用0.5%的已二胺已烷液做為提取劑，可有效地防止吸附。

二、操作進樣閥的問題

目前，在分析型高效液相色譜儀中常用的進樣閥是7725型進樣閥，其內部的六通閥結構使進樣操作非常方便，但是，如果使用不當，也會帶來問題。例如，在高效液相色譜法的試驗過程中，有時會有異常色譜峰的出現以及重現性不好的問題，這主要是由于操作方法不當所引起，要想解決此類問題，需從以下幾個方面入手。

1、進樣量的控制。

用進樣閥來進樣時，閥內的樣品環(huán)是定量的，(一般分析型進樣閥的樣品環(huán)體積為20ul)，由于進樣時，注射到進樣閥內的樣品溶液在樣品環(huán)的管路中有徑向的速度梯度(即管軸處比管壁處的液流速度快)。因此，要想使樣品環(huán)中充滿樣品溶液，從而使用進樣閥來準確地定量，則必須使進樣量大于樣品環(huán)體積的2倍。如果用注射器來控制進樣量，則最大只能注射樣品環(huán)體積1/2的量，這樣才能防止部分樣品由溢流管溢出從而導致定量分析的誤差。

2、進樣閥的清潔問題。

如果樣品環(huán)中有上次進樣時樣品的殘留，必然會污染下次注射進的樣品，為防止這種現象的發(fā)生，應按下列步驟操作：a.進樣閥有2個位置，INJECT和LOAD。首先在LOAD位置時，以注射器將流動相注入進樣閥內清洗幾次，每次用量大約40ul；b.然后將進樣閥板手扳至INJECT位置時，再以流動相清洗幾次，每次用量還是40ul；c.最后，再將樣品注射到進樣閥里。

按照上述的步驟操作，可以避免由進樣閥引起的污染，從而使干擾峰消除并提高分析結果的準確性。

3、進樣閥溢流管的堵塞。

有時，進樣閥的溢流管會發(fā)生堵塞現象，向進樣閥內注射樣品時，注射針推不動。此故障是由于溢流管的堵塞所致。堵塞的原因多半是由于溶解樣品的流動相用的是鹽溶液，而其中的鹽在溢流管的排空端口處結晶所致。此時，可用小燒杯盛少量蒸餾水對溢流管口稍加浸泡，端口處鹽的結晶就能被溶解掉，故障排除。如能在每次進樣完成之后，用蒸餾水反復沖洗至溢流管中的鹽分全部沖出，則可避免此故障的發(fā)生。

三、流動相(MOBLLE PHASE)的問題

甲醇和乙腈在高效液相色譜分析法中常常被用來配制流動相。高效液相色譜法中常用的試劑最好是高等級的專用試劑，如色譜純試劑。在要求不太嚴格時，優(yōu)級純甚至分析純的試劑也能用。高效液相色譜分析法中常用的是紫外檢測器，因此，從降低基線噪音和提高分析靈敏度上來考慮，應該使用紫外吸收小且雜質含量少的色譜純試劑。

1、流動相的過濾。

配制好的流動相在使用前一定要先用0.5um孔徑的微孔濾膜來過濾。這是因為溶液中含有很多肉眼難以發(fā)現的微小顆粒，如果不把它們?yōu)V除掉，就會堵塞泵口、柱頭上的過濾器，這樣就堵塞了流動相的正常通道，使色譜柱的阻力增加，柱壓升高，柱效下降。碰到這種情況時，要換用經過濾的流動相，并將堵塞的濾器拆下來浸泡在20%的硝酸水溶液中以超聲波清洗機清洗20分鐘，以除去濾片上的堵塞物。

2、流動相的脫氣。

流動相在使用前必須脫氣，以盡可能的除去溶解在流動相中的氣體，否則，這些氣體會使柱填料的性能降低，還能夠對檢測器的信號產生很大的干擾。脫氣有多種方法，如超聲脫氣、真空脫氣、氮氣脫氣等。真空脫氣法和氮氣流脫氣法是目前最常用的脫氣法。水和甲醇混合后會產生大量的氣泡，如果不脫氣就使用，氣泡就會進入色譜柱和檢測器，并將影響分析工作的正常進行。?

四、色譜柱的使用和保養(yǎng)

色譜柱是高效液相色譜儀最主要的部件，被測物質能否被很好的分離和測定，色譜柱的性能起著決定性的作用。因此，在日常工作中，應特別注意色譜柱的正確使用和維修保養(yǎng)，以延長色譜柱的使用壽命。

1、使用預柱和保護柱。

預柱(pre-column)安裝于泵和進樣器之間，它給色譜柱中的流動相提供了完全的平衡，并防止了對柱填料有破壞作用的組分或污染物進入色譜柱。保護柱(guard column)可以阻擋能夠牢固地吸附于色譜柱上的組分進入色譜柱，保護柱應與色譜柱的填料相同。預柱和保護柱可以經常更換，而不需要經常更換色譜柱，這就延長了色譜柱的使用壽命。

2、防止氣體進入色譜柱。

有些色譜柱(如凝膠柱)是不允許氣泡進入的，否則將會使柱效降低甚至形成微小的難以驅除的氣室。因此，為了防止氣泡進入色譜柱，一定要使用經過脫氣的流動相，并且要嚴格按照下列步驟來安裝色譜柱。a.拆卸下色譜柱入口處的密封螺絲，觀察是否有溶劑滲出；b.如有溶劑滲出，即可將色譜柱接到管路上，以避免氣泡的進入；c.如無溶劑滲出時，表明色譜柱的此端已經進去空氣了，此時，可將色譜柱的出口端接到進樣閥上，以流動相來反方向沖洗色譜柱，以便將柱內的空氣排除。最好以0.2ml/min的小流量來沖色譜柱，如果溶劑的流速太快或者是壓力突然的上升都將會導致柱性能的降低；d.如果流出的溶劑里不含有氣泡，說明柱內的氣體已經被排出了，再將色譜柱以正確的方向接好，這樣氣泡就進不到色譜柱里面了。

3、色譜柱的清洗。

為了不使被測物質和雜質停留在色譜柱中，在每次的樣品分析工作完成之后，都應及時地清洗色譜柱。首先要用對被測樣品洗脫能力強的溶劑來洗脫色譜柱，以分析工作中常用的反相色譜分析法為例，因其先流出的物質是極性大的物質，此時應用100%的甲醇或使用異丙純、四氫呋喃等極性稍弱的溶劑將吸附在柱內的極性小的物質洗脫下來，洗脫液的用量一般為柱體積的20倍即可。如果流動相是緩沖溶液，則應先用蒸餾水來沖洗色譜柱，以沖掉柱內的鹽，然后再用合適的溶劑來沖洗。

凝膠濾過色譜法(Gel Filtration Chromatography)中所使用的凝膠柱常用緩沖溶液做流動相，用完之后當然要用蒸餾水來沖洗。如果是連續(xù)操作，可以將緩沖溶液置于柱內過夜，但最好是維持小流速(＜0.5ml/min)以防止緩沖鹽的析出，如果流動相中含有鹵化物，即使是停一夜，也必須要用蒸餾水將色譜柱沖洗干凈，以防止它們對柱體的腐蝕。

4、色譜柱的存放。

如果色譜柱暫時不用，存放時要注意以下幾點：

a.幾天之內的短期放置，應先用溶劑沖洗好色譜柱(如凝膠柱則用蒸餾水來沖洗)，再把色譜柱的兩頭用密封螺絲密封好即可。

b.如果色譜柱長期不用，僅用上述方法來處理就不行了，這時應使用色譜柱使用說明書中所指明的溶劑來充滿色譜柱，反相柱一般使用甲醇，正相柱則可用正已烷或庚烷，而凝膠柱則不能用水了，因柱內如果有微生物的生長則會使柱效降低，此時應用0.05%的NaNs水溶液(防腐劑)來沖洗色譜柱，再將色譜柱封嚴。色譜柱長期放置時，一定要將色譜柱的兩端封嚴，以防止由于溶劑揮發(fā)而造成的柱填料干縮現象，因這可導致柱效的嚴重降低。

c.色譜柱應貯存在室溫下，如果放置于0℃以下的環(huán)境里，柱內就會結冰，這也將導致柱效的降低。

高效液相色譜儀的構造高效液相色譜儀（HPLC）一般由高壓輸液系統(tǒng)、進樣系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、記檢測系統(tǒng)、數據處理系統(tǒng)等幾部分組成。制備型儀器還需配有餾份收集系統(tǒng)。為了取得較好的分析結果，HPLC?儀器對于準確度、精確度、靈敏度及結果重現性有較高的要求。

高效液相色譜儀的工作原理

儲液器中的流動相被高壓泵打入系統(tǒng)，樣品溶液經進樣器進入流動相，被流動相載入色譜柱(固定相)內，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數，在兩相中作相對運動時，經過反復多次的吸附-解吸的分配過程，各組分在移動速度上產生較大的差別，被分離成單個組分依次從柱內流出，通過檢測器時，樣品濃度被轉換成電信號傳送到記錄儀，數據以圖譜形式打印出來。

擴展資料：

高效液相色譜儀的構造高效液相色譜儀（HPLC）一般由高壓輸液系統(tǒng)、進樣系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、記檢測系統(tǒng)、數據處理系統(tǒng)等幾部分組成。制備型儀器還需配有餾份收集系統(tǒng)。為了取得較好的分析結果，HPLC?儀器對于準確度、精確度、靈敏度及結果重現性有較高的要求。

A

BOUT

高壓輸液系統(tǒng)

高壓輸液系統(tǒng)包括：溶劑儲液瓶、溶劑脫氣裝置、高壓輸送泵以及梯度洗脫裝置。其中，高壓輸液泵是高效液相色譜儀的主要部件之一，輸送壓力達150―350×105Pa。輸液系統(tǒng)要為HPLC儀器提供流量恒定、準確、無脈沖的流動相，流量的精度和長期的重復性要好，同時還要提供精度好、準確度高、重現性好的多元溶劑梯度。因此，輸液泵的好壞直接影響著整個系統(tǒng)的質量和分析結果的可靠性。

進樣系統(tǒng)：進樣能在試樣引入色譜柱，有六個接口：1,4之間接定量環(huán)；2接高壓泵；3接色譜柱；5,6接廢液管。

色譜分離系統(tǒng)：色譜柱通常為不銹鋼柱，內裝各種填充劑。常用的填料為硅膠，可用于正相色譜;化學鍵合固定相，根據鍵合的基團不同，可用于反相或正相色譜。其中、最常用的是十八烷基鍵合硅膠，即ODS柱，可用于反相色譜或離子對色譜。

檢測系統(tǒng)：檢測系統(tǒng)用于連續(xù)檢測色譜柱流出的物質，進行定性定量分析。要求其靈敏度高、噪音小、基線穩(wěn)定、響應值的線性范圍寬等。近年來各國都在研究開發(fā)新的檢測技術，進一步擴大了HPLC的應用。

根據檢測需要的不同檢測器可分為紫外檢測器(UVD)、示差折光檢測器(RID)、電化學檢測器(ECD)、紅外檢測器(IRD)、核磁共振檢測器(NMRD)、質譜檢測器(MSD)、蒸發(fā)光散射檢測器(ELSD)、小角度激光散射檢測器(LALLSPD)。

數據處理系統(tǒng)：高效液相色譜的分析結果除可用記錄儀繪制譜圖外，還可使用微處理機和色譜數據工作站來記錄和處理色譜分析的數據。

實驗內容和原理：

儲備器中的流動相被高壓泵打入系統(tǒng)，樣品溶液經進樣器進入流動相，被流動相載入色譜柱（固定相）中；由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數，在兩相中作相對運動時，經過反復多次的吸附―解吸的分配過程，各組分在移動速度上產生較大的差別，被分配成單個祖墳依次從柱內流出，經過哦檢測器時，樣品濃度被轉換成電信號傳送到記錄儀，數據以圖譜形式打印出來。

在適宜的條件下，高效液相色譜可分離溶液中不同的組分，樣品進高效液相色譜儀，經反相C18液相色譜分離后，以色譜峰的保留時間定性，利用色譜峰面積在一定范圍內與濃度成線性關系進行定量。本實驗采用內標法，用β-胡蘿卜素標準品分析未知濃度的類胡蘿卜素產物的相關含量。

實驗步驟：

1、 樣品和標準品溶解和過濾：用丙酮作溶劑，溶解β-胡蘿卜素標準品和類胡蘿卜素樣品。用濾膜（0.45um）過濾，備用。

2、 開機，依次通過各分離單元、檢測器、計算機電源。

3、 流動相脫氣，確認所有溶劑管路都充滿溶劑。

4、 啟動溶劑管理系統(tǒng)，沖洗自動進樣器和進樣針，裝入樣品和轉盤，編輯分析方法及執(zhí)行樣品分析表。

5、 樣品測定：色譜條件，色譜柱（C18，4.6mm*250mm，5um）；流動相，甲酸；乙腈；異丙醇=5：4：1（v/v）；流速 1ml/min；檢測波長，480nm。

單位內標法定量：取混合使用液20ul注入高效液相色譜儀進行分離。記錄各個峰的峰面積。按下式計算相對含量。

q樣品=（q標準品*A樣品）/A標準品

6、 關機，使用完畢后，按規(guī)定用適當的溶劑沖洗色譜柱、系統(tǒng)管路、自動進樣器、進樣針和柱塞桿密封墊，關閉電源開關。數據采集完畢后，關閉紫外檢測器電源開關。處理數據后，關閉計算機電源開關，并做使用登記。

自20世紀70年代以來，中國已有多個研究部門和工廠開發(fā)和生產高液相色譜儀。 LC已進入中國許多科學領域的實用階段，特別是對熱穩(wěn)定性差或蒸氣壓低的樣品組分進行分析，顯示出LC的優(yōu)越性。

近年來，高液相色譜儀在油脂分析方面取得了突破，特別是在石油中測定多環(huán)芳烴、重烴中。以己烷、二氯甲烷為流動相，茍愛仙采用多維高效液相色譜技術和適當的梯度洗脫條件，實現了殘留烴基的良好分離和檢測。呂振波等還使用HPLC分離和分析潤滑基礎油的化學組成。使用氰基柱和二氧化硅柱雙柱的組合。正己烷用作流動相，折射率檢測器用于檢測不同的來源。和蒸餾范圍內的基礎油烴的家族組成。

高效液相色譜儀用途

過去，高效液相色譜儀在石油化學工業(yè)中，農藥、環(huán)保，薄層色譜（TLC）和氣相色譜（OC）常用于含量測定，而液相色譜（LC）僅用于測定標準樣品。并研究分離的可能性。

高效液相色譜在生命科學研究工作中，最大的問題是基因的解密。從基因組DNA序列，基因的表達時間無法回答、表達量、蛋白質、的翻譯后加工和修飾及其亞細胞分布。這些問題在基因組中無法解決，預計會在Proteome研究中找到答案。在研究的細胞中有30,000到50,000種具有不同功能的蛋白質。目前，蛋白質組學研究中使用的雙向電泳方法只能區(qū)分2000~3000個蛋白質點?？梢酝ㄟ^使用具有尺寸排阻色譜的二維HPLC高效液相色譜進行預分離來嘗試現代蛋白質組分析。高效液相色譜和雙向電泳將成為蛋白質組學的重要分離工具。因此，高效液相色譜將為揭示生命的奧秘做出更大的貢獻。本內容來源：冉盛網百度貼吧貼子：分析各大品牌高效液相色譜儀哪家好？

高效液相色譜儀的使用和原理分析對于新手來說有很大的幫助

高效相色譜法是一種分離技術，試樣混合物的分離過程也就是試樣中各組分在稱之為色譜分離柱中的兩相間不斷進行著的分配過程。

其中的一相固定不動，稱為固定相；另一相是攜帶試樣混合物流過此固定相的流體（氣體或液體），稱為流動相。

標簽：液相色譜儀高效原理