一、直接法提取DNA的步驟?

土壤DNA???土壤有DNA??土壤微生物??一樣的,用土壤浸出液,照一樣的流程

一般真核細胞基因組DNA有107-9bp，可以從新鮮組織、培養(yǎng)細胞或低溫保存的組織細胞中提取，常是采用在EDTA以及SDS等試劑存在下用蛋白酶K消化細胞，隨后用酚抽提而實現(xiàn)的。這一方法獲得的DNA不僅經(jīng)酶切后可用于Southern分析，還可用于PCR的模板、文庫構(gòu)建等實驗。2 I+ P7 Y! x d/ {3 {

根據(jù)材料來源不同，采取不同的材料處理方法，而后的DNA提取方法大體類似，但都應(yīng)考慮以下兩個原則：

1、 防止和抑制DNase對DNA的降解。

2、 盡量減少對溶液中DNA的機械剪切破壞。

試劑準(zhǔn)備：

1、 TE: 10mM Tris-HCl (pH 7.8); 1mM EDTA (pH 8.0)。

2、 TBS: 25mM Tris-HCl (pH 7.4); 200mM NaCl; 5mM KCl。 `4 {1 T( G f+ D9 @0 ~9 g) e7 y; O

3、 裂解緩沖液：250mM SDS; 使用前加入蛋白酶K至100mg/ml。& Z1 H, h: o( P7 D

4、 20% SDS 6 k8 i) @+ N5 W- V$ v; y# }2 x

5、 2mg/ml蛋白酶K 2 S9 f$ `) m/ ^4 C

6、 Tris飽和酚（pH 8.0）、酚/氯仿（酚∶氯仿=1∶1）、氯仿

7、 無水乙醇、75%乙醇

試驗步驟：! y) e% f( A; r; j+ j

材料處理：

1、 新鮮或冰凍組織處理：/ ~$ + @) v2 h; a6 G% w' K

1) 取組織塊0.3-0.5cm3, 剪碎，加TE 0.5ml，轉(zhuǎn)移到勻漿器中勻漿。. R% A. y5 z- N

2) 將勻漿液轉(zhuǎn)移到1.5ml離心管中。 F; k$ S4 J9 _' q+ Y2 ~

3) 加20% SDS 25 ml，蛋白酶K (2mg/ml) 25 ml，混勻。& ^% [8 p! u, H/ x U# `% V( I

4) 60°C水浴1-3hr。

2、 培養(yǎng)細胞處理：

1) 將培養(yǎng)細胞懸浮后，用TBS洗滌一次。0 s* r) c: v1 E

2) 離心4000g×5min，去除上清液。# p3 J. U, l. b7 v! _

3) 加10倍體積的裂解緩沖液。2 W4 L% h/ G4 P2 m6 K

4) 50-55°C水浴1-2hr。

DNA提取：

1、 加等體積飽和酚至上述樣品處理液中，溫和、充分混勻3min。3 ^( k# l, z. E! f5 n% H. a

2、 離心5000g×10min，取上層水相到另一1.5ml離心管中。; _4 u w2 t9 K) f; C) ]! a

3、 加等體積飽和酚，混勻，離心5000g×10min，取上層水相到另一管中。

4、 加等體積酚/氯仿，輕輕混勻，離心5000g×10min，取上層水相到另一管中。如水相仍不澄清，可重復(fù)此步驟數(shù)次。# u- t0 }. d5 J z5 y# o

5、 加等體積氯仿，輕輕混勻，離心5000g×10min，取上層水相到另一管中。% q/ ?3 f, U8 t9 b

6、 加1/10體積的3M醋酸鈉（pH 5.2）和2.5倍體積的無水乙醇，輕輕倒置混勻。

7、 待絮狀物出現(xiàn)后，離心5000g×5min，棄上清液。

8、 沉淀用75%乙醇洗滌，離心5000g×3min ，棄上清液。

9、 室溫下?lián)]發(fā)乙醇，待沉淀將近透明后加50-100ml TE溶解過夜

二、氯仿本身有毒嗎？

氯仿并不是本身有劇毒，只是用的時候會變質(zhì)產(chǎn)生毒氣，所以小心取用就沒事 。

氯仿，又稱。物理化學(xué)特性：常溫下無色、透明、易揮發(fā)的液體，有特殊香甜氣味，沸點61.2℃，熔點-63.5℃，微溶于水，易溶于乙醇、乙醛、苯等溶劑中，有麻醉性，不易燃，與火焰接觸會燃燒，并放出光氣，在氯甲烷中最易水解成甲酸和鹽酸（HCl），穩(wěn)定性差，450℃以上發(fā)生熱分解，能進一步氯化為四氯化碳（CCl4）。 主要用途：制造氟里昂22及聚四氟乙烯單體的原料，同時也是優(yōu)良的有機氯溶劑，能迅速溶解脂肪、油脂、樹脂和蠟，常用于配制干洗劑和工業(yè)品的脫脂溶劑，在粘結(jié)劑、食品包裝塑料和樹脂的調(diào)和中用作溶劑，在染料、殺蠕蟲藥、殺真菌劑和煙草籽苗防霉劑生產(chǎn)中用作中間體。在醫(yī)藥工業(yè)有較廣泛的用途，可用作青霉素等藥品的萃取劑或溶劑，配制止痛軟膏等藥品。有麻醉性，可在部分獸藥中用作麻醉劑。

三、誰能給我講一下高中化學(xué)里關(guān)于氯的所有知識點啊？

①顏色氣味狀態(tài)：通常情況下為有刺激性氣味的黃綠色的氣體，劇毒。

②密度：比空氣密度大,密度為3.170g/L

③易液化。熔沸點較低，壓強為101kPa、溫度為-34.6℃時易液化。液態(tài)氯為金黃色。如果將溫度繼續(xù)冷卻到-101℃時，液氯變成固態(tài)氯。

④溶解性：易溶于有機溶劑，難溶于飽和食鹽水。1體積水在常溫下可溶解2體積氯氣，形成氯水. 化學(xué)式：Cl2

①毒性 氯氣是一種有毒氣體，它主要通過呼吸道侵入人體并溶解在黏膜所含的水分里，生成次氯酸和鹽酸，對上呼吸道黏膜造成有害的影響：次氯酸使組織受到強烈的氧化；鹽酸刺激黏膜發(fā)生炎性腫脹，使呼吸道黏膜浮腫，大量分泌黏液，造成呼吸困難，所以氯氣中毒的明顯癥狀是發(fā)生劇烈的咳嗽。癥狀重時，會發(fā)生肺水腫，使循環(huán)作用困難而致死亡。由食道進入人體的氯氣會使人惡心、嘔吐、胸口疼痛和腹瀉。1L空氣中最多可允許含氯氣0.001毫克，超過這個量就會引起人體中毒。

②助燃性 在一些反應(yīng)中，氯氣可以支持燃燒

【例】

銅在氯氣中燃燒生成氯化銅

化學(xué)方程式：Cu＋Cl2＝CuCl2（條件：點燃）

現(xiàn)象：銅劇烈燃燒并生成棕黃色煙

鐵在氯氣中燃燒生成氯化鐵

化學(xué)方程式：2Fe＋3Cl2＝2FeCl3（條件：點燃）

現(xiàn)象：劇烈燃燒并生成棕褐色煙

氫氣在氯氣中燃燒生成

化學(xué)方程式：H2＋Cl2＝2HCl（條件：點燃）

現(xiàn)象：劇烈燃燒產(chǎn)生蒼白色火焰

注：氯氣具有強氧化性，因此，產(chǎn)物中像Fe、Cu這樣的變價金屬的化合價表現(xiàn)為最高價。

③與金屬反應(yīng) 【例】

鈉在氯氣中燃燒生成氯化鈉

化學(xué)方程式：2Na＋Cl2＝2NaCl（條件：點燃）

現(xiàn)象：鈉劇烈燃燒并產(chǎn)生白煙

注：氯氣具有強氧化性，因此，產(chǎn)物中像Fe、Cu這樣的變價金屬的化合價表現(xiàn)為最高價。

④與非金屬反應(yīng) 【例】

氫氣在氯氣中燃燒或受到光照生成氣體

化學(xué)方程式：H2+Cl2=2HCl（條件：點燃或光照）

現(xiàn)象：燃燒發(fā)出蒼白色火焰，光照時會發(fā)生爆炸現(xiàn)象

⑤與水反應(yīng) 在該反應(yīng)中，氧化劑是Cl2，還原劑是Cl2,在水中有歧化現(xiàn)象。

化學(xué)方程式是：Cl2+H2O＝HCl+HClO

⑥與堿溶液反應(yīng) 【例】

Cl2＋2NaOH＝NaCl＋NaClO＋H2O

2Cl2＋2Ca(OH)2＝CaCl2＋Ca(ClO)2＋2H2O

上述兩反應(yīng)中，Cl2作氧化劑和還原劑，有歧化現(xiàn)象．編輯本段用途 用于消毒，制鹽酸，制漂白粉，制多種農(nóng)藥；制氯仿等有機溶劑；制塑料等． 編輯本段制取 1．工業(yè)生產(chǎn)中用電解飽和食鹽水法來制取氯氣：

2NaCl＋2H2O＝ H2↑＋Cl2↑＋2NaOH（條件：通電）

2．實驗室通常用氧化HCl或濃鹽酸的方法來制取氯氣，常見的氧化劑有：MnO2、K2Cr2O7、KMnO4、KClO3、Ca(ClO)2，發(fā)生的反應(yīng)分別是：

4HCl（濃）＋MnO2 ＝MnCl2＋Cl2↑＋2H2O

14HCl＋K2Cr2O7＝2KCl＋2CrCl3＋7H2O＋3Cl2↑

16HCl＋2KMnO4＝2KCl＋2MnCl2＋8H2O＋5Cl2↑

6HCl＋KClO3＝KCl＋3H2O＋3Cl2↑

4HCl＋Ca(ClO)2＝CaCl2＋2H2O＋2Cl2↑

如不用濃鹽酸，亦可用NaCl(固體)跟濃H2SO4來代替．如：

2NaCl＋MnO2＋3H2SO4 ＝2NaHSO4＋MnSO4＋Cl2↑＋2H2O

也可用非金屬之間的置換反應(yīng)：

2HCl + F2 =2HF + Cl2↑

注：切勿使用玻璃器材！ 氯氣的生產(chǎn)方法經(jīng)歷了漫長的發(fā)展過程．1774年瑞典化學(xué)家舍勒用軟錳礦(含有二氧化錳)和鹽酸作用，首先制得了氯氣：

4HCl(濃)＋MnO2＝ MnCl2＋2H2O＋Cl2↑

然而，由于當(dāng)時還不能夠大量制得鹽酸，故這種方法只限于實驗室內(nèi)制取氯氣．后來法國化學(xué)家貝托雷把氯化鈉、軟錳礦和濃H2SO4的混合物裝入鉛蒸餾器中，經(jīng)過加熱制得了氯氣：

2NaCl＋3H2SO4(濃)＋MnO2 ＝2NaHSO4＋MnSO4＋2H2O＋Cl2↑

標(biāo)簽：高中化學(xué)知識點一下氯仿的生產(chǎn)